編者：資源增量是實(shí)驗(yàn)動(dòng)物科技發(fā)展的核心任務(wù)，是實(shí)驗(yàn)動(dòng)物對(duì)生命科學(xué)研究提供支撐和服務(wù)的基礎(chǔ)和保障。自上世紀(jì)80年代以來(lái)，我國(guó)老一輩實(shí)驗(yàn)動(dòng)物科學(xué)家苦心孤詣，在實(shí)驗(yàn)動(dòng)物資源研發(fā)工作中取得的多項(xiàng)開(kāi)創(chuàng)新成果。
1988年《實(shí)驗(yàn)動(dòng)物管理?xiàng)l例》發(fā)布實(shí)施，在實(shí)驗(yàn)動(dòng)物工作規(guī)范化、法制化管理，保障實(shí)驗(yàn)動(dòng)物和動(dòng)物實(shí)驗(yàn)的質(zhì)量，推動(dòng)我國(guó)科技發(fā)展和民生保障等方面發(fā)揮了重要作用。特別是在實(shí)驗(yàn)動(dòng)物資源標(biāo)準(zhǔn)化、新品種/品系開(kāi)發(fā)和動(dòng)物模型創(chuàng)制方面，取得了令人矚目的成果。
為此，借“科技資訊”之窗，陸續(xù)推出我國(guó)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物專(zhuān)家在此領(lǐng)域所作的工作及取得的應(yīng)用成果。
SPF金黃地鼠種群建立及標(biāo)準(zhǔn)化研究
夏放
中國(guó)生物技術(shù)集團(tuán)成都生物制品研究所有限責(zé)任公司
金黃地鼠(Golden hamster; Mesocricetus auratus)又稱(chēng)敘利亞地鼠，金黃色，成年體重120-150克，染色體22對(duì)。目前世界各國(guó)飼養(yǎng)的不同品系的金黃地鼠,都是1 9 3 0年在敘利亞發(fā)現(xiàn)的同胞后代，由于同一祖先, 遺傳學(xué)上血緣相近。2003年成都生物制品研究所實(shí)驗(yàn)動(dòng)物中心首先在國(guó)內(nèi)建立了SPF金黃地鼠種群，主要用于乙型腦炎減毒活疫苗制品生產(chǎn)，本文就SPF金黃地鼠種群建立及標(biāo)準(zhǔn)化做簡(jiǎn)要介紹。
一、金黃地鼠生物學(xué)特性
1、一般特性
金黃地鼠毛色通常呈金黃色，成年體重雌性90g-150g，雄性80g-130g，尾長(zhǎng)1.53cm，晝伏夜行動(dòng)物，夜間8-11時(shí)行動(dòng)最為活躍，白天基本都在睡眠，睡眠時(shí)全身肌肉松弛，室溫低于10度時(shí)出現(xiàn)冬眠；牙齒堅(jiān)硬，雌雄都好斗，容易互相撕咬。金黃地鼠為雜食性動(dòng)物，有很強(qiáng)的儲(chǔ)存食物的習(xí)性，口腔兩側(cè)各有1個(gè)頰囊，可將食物儲(chǔ)存于加囊內(nèi)。
2、生理學(xué)特性及應(yīng)用
金黃地鼠性成熟早,雌性60日齡，雄性75日齡即可配種繁殖，妊娠期15-17天,年產(chǎn)4-6胎,每胎產(chǎn)仔8-10只，哺乳期20-25天，出生體重2-3克，離乳體重25-28克，平均壽命2-3年。
金黃地鼠由于具有特殊的頰囊，常用于腫瘤學(xué)研究、血管生理學(xué)和微循環(huán)研究，適用于腫瘤移植、篩選、誘發(fā)和治療性研究、血管生理學(xué)和微循環(huán)研究的動(dòng)物模型。此外金黃地鼠由于性成熟早，懷孕期短，動(dòng)情周期準(zhǔn)確，因而適用于生殖生理學(xué)研究。
二、金黃地鼠標(biāo)準(zhǔn)化研究
1、SPF金黃地鼠種群建立
2003年成都公司采用無(wú)菌剖腹產(chǎn)技術(shù)建立了SPF金黃地鼠種群，2004年規(guī)?；a(chǎn)后開(kāi)始用于乙型腦炎減毒活疫苗生產(chǎn)，2010年對(duì)該種群再次采用無(wú)菌剖腹產(chǎn)技術(shù)，并嚴(yán)格按照遺傳矩陣繁育模式，建立起720只SPF金黃地鼠組成的標(biāo)準(zhǔn)化核心種群。
2、SPF金黃地鼠的生物學(xué)特性研究
本公司分別在2006和2008年對(duì)SPF金黃地鼠進(jìn)行了生長(zhǎng)發(fā)育指標(biāo)、各發(fā)育階段各臟器指標(biāo)，繁殖生理指標(biāo)以及主要生理生化指標(biāo)進(jìn)行了系統(tǒng)性研究。研究獲得的基礎(chǔ)數(shù)據(jù)填補(bǔ)了國(guó)內(nèi)SPF金黃地鼠研究空白，為拓寬SPF金黃地鼠的應(yīng)用范圍奠定了基礎(chǔ)。
3、SPF金黃地鼠排除了多種微生物和寄生蟲(chóng)
從2003年開(kāi)始，本公司每年進(jìn)行6次SPF金黃地鼠種群的微生物和寄生蟲(chóng)檢測(cè)，其中一次送澳大利亞Cerberus專(zhuān)業(yè)實(shí)驗(yàn)室檢測(cè)，檢測(cè)的病毒達(dá)到18種，細(xì)菌16種和5種寄生蟲(chóng)，檢測(cè)結(jié)果均為陰性，同時(shí)我們還專(zhuān)門(mén)送英國(guó)BioReliance實(shí)驗(yàn)室檢測(cè)地鼠逆轉(zhuǎn)錄病毒和地鼠多瘤病毒，排除了這2種病毒，從而為疫苗生產(chǎn)提供了十分安全的動(dòng)物原材料。
4、定期對(duì)SPF金黃地鼠種群進(jìn)行遺傳檢測(cè)
從2008年開(kāi)始，本公司定期對(duì)SPF金黃地鼠種群進(jìn)行遺傳檢測(cè)，通過(guò)采用微衛(wèi)星DNA標(biāo)記技術(shù)和DNA測(cè)序技術(shù)，證明了SPF金黃地鼠種群的遺傳穩(wěn)定性良好。同時(shí)由于建立了采用科學(xué)的繁育體系，十五年來(lái)SPF金黃地鼠繁殖性能一直保持穩(wěn)定，平均產(chǎn)仔數(shù)保持在10只，成活率達(dá)到90%以上。
5、建立符合國(guó)際標(biāo)準(zhǔn)的SPF動(dòng)物廠房設(shè)施
2003年本公司參照國(guó)外標(biāo)準(zhǔn)，建立了一棟1840平方米的SPF動(dòng)物生產(chǎn)廠房，每個(gè)飼養(yǎng)單元都設(shè)立前室和后室，采用獨(dú)立的空調(diào)機(jī)組，10幾年來(lái)該廠房運(yùn)行良好。
2009年為了通過(guò)WHO乙腦疫苗預(yù)認(rèn)證，本公司公司新建了一棟3600平方米的廠房，專(zhuān)門(mén)用于SPF金黃地鼠保種和生產(chǎn)；該車(chē)間完全采用國(guó)際標(biāo)準(zhǔn)建設(shè)，整個(gè)廠房分為隔離器保種車(chē)間和規(guī)?；a(chǎn)車(chē)間，前者擁有28臺(tái)雙層不銹鋼隔離器，獨(dú)立的空調(diào)機(jī)組，進(jìn)入隔離器空氣經(jīng)過(guò)4次過(guò)濾處理，并配備UPS電源；生產(chǎn)車(chē)間共有6個(gè)獨(dú)立的飼養(yǎng)單元和空調(diào)機(jī)組，整個(gè)建筑對(duì)外窗戶(hù)完全密閉，飼養(yǎng)單元所有的門(mén)完全互鎖單向開(kāi)啟，并有一套24小時(shí)監(jiān)控系統(tǒng)和報(bào)警系統(tǒng)，任何溫、濕度和壓差異常都會(huì)及時(shí)報(bào)警，這種設(shè)計(jì)完全避免了交叉污染，從而從硬件為動(dòng)物種群安全提供了保障。 2012年WHO專(zhuān)家現(xiàn)場(chǎng)檢查對(duì)該車(chē)間的設(shè)計(jì)和工藝布局給予充分肯定和認(rèn)可。
6、完善的科學(xué)管理制度和SOP
本公司在2010年建立一套完善的QMS體系，該體系包括40多個(gè)管理文件，200多個(gè)SOP和記錄，這其中包括實(shí)驗(yàn)動(dòng)物質(zhì)量控制程序、實(shí)驗(yàn)動(dòng)物福利方針、實(shí)驗(yàn)動(dòng)物風(fēng)險(xiǎn)管理程序、實(shí)驗(yàn)動(dòng)物中心HACCP以及應(yīng)急處置預(yù)案等管理文件，動(dòng)物繁殖育種、日常飼養(yǎng)管理和飼養(yǎng)間清場(chǎng)消毒以及高壓鍋操作等SOP；所有文件和SOP必須經(jīng)QA審核簽發(fā)和定期修訂，記錄有嚴(yán)格的流水號(hào)。這樣可以保證日常的工作質(zhì)量，一旦發(fā)生問(wèn)題，具有可追溯性。對(duì)飼養(yǎng)人員進(jìn)行嚴(yán)格培訓(xùn)，熟悉和掌握實(shí)驗(yàn)動(dòng)物基礎(chǔ)知識(shí)和相關(guān)SOP，并考試合格后才能上崗；
7、健全的動(dòng)物質(zhì)量控制體系
本公司制訂有“實(shí)驗(yàn)動(dòng)物檢驗(yàn)與簽發(fā)程序”，“實(shí)驗(yàn)動(dòng)物質(zhì)量控制程序”和“核心群SPF金黃地鼠健康監(jiān)測(cè)程序”等質(zhì)量控制文件；公司QA負(fù)責(zé)SPF金黃地鼠種群抽樣和動(dòng)物合格簽發(fā)放行，公司QC每季度按國(guó)家標(biāo)準(zhǔn)對(duì)核心群和生產(chǎn)群金黃地鼠種群抽樣檢測(cè)；每季度對(duì)地鼠飼料檢測(cè)營(yíng)養(yǎng)成份，每批滅菌飼料做無(wú)菌檢驗(yàn)，飼料實(shí)行QA簽發(fā)放行制度；每月對(duì)滅菌飲用水和墊料做無(wú)菌檢驗(yàn)，每月監(jiān)測(cè)飼養(yǎng)間微生物狀態(tài)，通過(guò)這一系列監(jiān)控措施，確保SPF金黃地鼠種群處于受控狀態(tài)。
8、驗(yàn)證與3C管理
本公司QA部門(mén)每年對(duì)動(dòng)物廠房的空調(diào)機(jī)組，隔離器和高壓滅菌器等關(guān)鍵設(shè)備進(jìn)行驗(yàn)證，并對(duì)各種儀表定期校驗(yàn)；一旦發(fā)生環(huán)境參數(shù)異常，設(shè)備異常和動(dòng)物種群異常必須按規(guī)定申報(bào)NC（不符合性），廠房設(shè)施和關(guān)鍵設(shè)備更改或更換按規(guī)定申報(bào)CC（變更控制），對(duì)于申報(bào)的NC應(yīng)有相應(yīng)的預(yù)防糾正措施（CAPA），防止類(lèi)似問(wèn)題再次出現(xiàn)或發(fā)生；物品高壓滅菌必須按驗(yàn)證后的模式裝載，記錄附上相應(yīng)高壓設(shè)備打印憑條。
三、SPF金黃地鼠在科研和疫苗生產(chǎn)應(yīng)用的重要意義
本公司從1978年開(kāi)始使用金黃地鼠制造狂犬疫苗，2000年開(kāi)始使用金黃地鼠制造乙型腦炎減毒活疫苗，2003年本公司建立了SPF金黃地鼠核心種群，2004年開(kāi)始建立規(guī)模化生產(chǎn)種群，從2005年開(kāi)始，每年用于制造乙型腦炎減毒活疫苗的SPF金黃地鼠達(dá)到14萬(wàn)只以上，生產(chǎn)量達(dá)到20萬(wàn)只，十五年來(lái)已經(jīng)累計(jì)供應(yīng)乙型腦炎減毒活疫苗生產(chǎn)近200萬(wàn)只，2013年本公司的乙腦減毒活疫苗制品成功通過(guò)WHO預(yù)認(rèn)證，作為關(guān)鍵原材料的SPF金黃地鼠質(zhì)量及質(zhì)控體系也得到了WHO檢查官員的高度認(rèn)可。近年來(lái)本公司的乙型腦炎減毒活疫苗年產(chǎn)量在6000萬(wàn)人份，包括出口2000多萬(wàn)人份，累計(jì)創(chuàng)造產(chǎn)值20多億，出口創(chuàng)匯近2億美元。此外SPF金黃地鼠還大量用于新疫苗的研發(fā)和省內(nèi)外進(jìn)行生殖生理學(xué)研究和其他動(dòng)物模型。目前本公司正在進(jìn)行無(wú)菌金黃地鼠研發(fā)，這將進(jìn)一步拓寬SPF金黃地鼠的應(yīng)用范圍，為開(kāi)發(fā)人類(lèi)疾病動(dòng)物模型服務(wù)。
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