肝硬化是不同慢性肝病導(dǎo)致肝臟彌漫性瘢痕形成過(guò)程的終末期,以肝臟彌漫性纖維化、假小葉形成和肝內(nèi)外血管增殖為特征的病理階段。基于世界衛(wèi)生組織研究,全球感染乙肝病毒(Hepatitis
B Virus,
HBV)高達(dá)20億,慢性HBV感染者占2.4億。每年由HBV感染誘發(fā)肝功能衰竭,肝硬化和肝細(xì)胞癌死亡人數(shù)達(dá)65萬(wàn)。動(dòng)物模型是臨床治療與理論研究的重要橋梁,建立良好的肝硬化動(dòng)物模型對(duì)其診斷及臨床防治而言意義突出。肝硬化動(dòng)物模型實(shí)驗(yàn)動(dòng)物以鼠為主,造模方式以藥物居多,但是目前模型制備與驗(yàn)證存在以下問(wèn)題,疾病動(dòng)物模型主要反映肝硬化的生化指標(biāo)和病理解剖方面的改變,割裂造模因素和自身臟腑之間相互聯(lián)系的關(guān)系,與中醫(yī)學(xué)整體觀念不符,疾病模型不能反映肝硬化特定的中醫(yī)證型。中醫(yī)證候動(dòng)物模型構(gòu)建與評(píng)價(jià)體系不全面,導(dǎo)致此動(dòng)物模型規(guī)范化艱巨,進(jìn)而影響后續(xù)開(kāi)展相關(guān)中醫(yī)藥實(shí)驗(yàn)研究。因此,采用數(shù)據(jù)挖掘的方式,從動(dòng)物種類(lèi)、造模方式等多方面分析總結(jié),探索肝硬化動(dòng)物模型的研究現(xiàn)狀及不足,能為肝硬化動(dòng)物模型的規(guī)范應(yīng)用提供參考依據(jù)。通過(guò)檢索中國(guó)知網(wǎng)、萬(wàn)方、維普、中國(guó)生物醫(yī)學(xué)文獻(xiàn)及PubMed數(shù)據(jù)庫(kù)獲取肝硬化動(dòng)物模型文獻(xiàn),歸納實(shí)驗(yàn)動(dòng)物種類(lèi)、造模方法、給藥方式、高頻檢測(cè)指標(biāo)等構(gòu)建數(shù)據(jù)庫(kù),并進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)分析最終納入符合標(biāo)準(zhǔn)的165篇文獻(xiàn)進(jìn)行統(tǒng)計(jì)。
將165篇文獻(xiàn)中34篇文獻(xiàn)中有多個(gè)體外動(dòng)物模型實(shí)驗(yàn),總頻數(shù)為221,共10類(lèi)動(dòng)物:

對(duì)165篇文獻(xiàn)中的221次實(shí)驗(yàn)進(jìn)行造模方法統(tǒng)計(jì)分類(lèi),發(fā)現(xiàn)主要以二乙基亞硝胺(DEN)、二甲基亞硝胺(DMN)、硫代乙酰胺(TAA)或四氯化碳(CCl4)聯(lián)用的基礎(chǔ)上,加其他限制條件(高脂飲食、乙醇、手術(shù)等)制造肝硬化動(dòng)物模型。其中無(wú)論何種CCl4的應(yīng)用均為激活肝星狀細(xì)胞生成細(xì)胞外基質(zhì),過(guò)量的ECM沉積致使肝纖維化甚至肝硬化以此來(lái)模擬肝硬化病理表現(xiàn),具體造模方法舉例如下表:

建立肝硬化動(dòng)物模型是為了利用所選品系的物種更好地模仿人類(lèi)肝硬化的發(fā)病過(guò)程與特征。肝硬化動(dòng)物模型的造模方法選擇多樣,在建立動(dòng)物模型時(shí)要綜合考慮造模方式、方法、動(dòng)物種類(lèi)等各種因素。目前,大鼠、小鼠、兔、犬等動(dòng)物常用于建立肝硬化模型。通過(guò)對(duì)肝硬化造模實(shí)驗(yàn)文獻(xiàn)進(jìn)行數(shù)據(jù)挖掘可知,建立肝硬化動(dòng)物模型選擇多使用Wistar大鼠、SD大鼠,因大鼠體型龐大方便操作且藥物敏感度高故實(shí)驗(yàn)中應(yīng)用更多。
大多實(shí)驗(yàn)文章在動(dòng)物性別選擇上以雌雄各半為主。造模方法中CCl4混合液皮下注射和腹腔注射使用較多;腹腔注射是將CCl4油劑直接注射到胃腸至漿膜層以外,由腹膜吸收進(jìn)入門(mén)靜脈效率高。皮下注射多以背部皮下以及后腿內(nèi)側(cè)為常用部位,由微血管吸收,相較于腹腔注射吸收速率慢,故注射同樣濃度的CCl4油劑時(shí),腹腔注射組死亡率更高。因此在肝硬化動(dòng)物模型制備過(guò)程種多選用皮下注射的方式。經(jīng)本文統(tǒng)計(jì)發(fā)現(xiàn),165篇實(shí)驗(yàn)文獻(xiàn)中所測(cè)指標(biāo)較多的有如下幾類(lèi):
① 表觀指標(biāo):觀察實(shí)驗(yàn)動(dòng)物毛發(fā)狀況、體質(zhì)量、活動(dòng)狀態(tài)等來(lái)判斷模型是否有引起肝硬化的相關(guān)癥狀,并探討藥物是否對(duì)肝硬化有治療作用。
② 蘇木精-伊紅染色(HE)肝組織病理形態(tài)學(xué)觀察:肝細(xì)胞表現(xiàn)為不同程度壞死、廣泛脂肪變性和炎性細(xì)胞浸潤(rùn),纖維間隔增生變粗,分割包繞形成假小葉。
③
生化指標(biāo):以全自動(dòng)生化分析儀檢測(cè)肝組織勻漿上清液或血清為主,通常檢測(cè)肝功能ALT、AST、CHO、CHE的含量,由于CHO是目前臨床診斷肝硬化的敏感性指標(biāo)之一,生理狀態(tài)下在肝臟中的濃度較高,肝臟一旦發(fā)生病變,CHO會(huì)隨之降低。其中肝組織HE染色光鏡觀察組織結(jié)構(gòu)形態(tài)變化、表觀指標(biāo)和血清指標(biāo)(T3、T4、TSH)的檢測(cè)組合應(yīng)用較多,是因?yàn)榕R床肝硬化及動(dòng)物模型的特征多在這3類(lèi)指標(biāo)中體現(xiàn)。此外,免疫組化法、蛋白質(zhì)免疫印跡法、PCR等多用于更深入地對(duì)肝硬化發(fā)病機(jī)制的研究。
Source: 湖北民族大學(xué)學(xué)報(bào)(醫(yī)學(xué)版). 2024 ,41 (02),基于數(shù)據(jù)挖掘的肝硬化動(dòng)物模型分析,DOI: 10.13501/j.cnki.42-1590/r.2024.02.011