目的 探究小鼠小腸固有層單細胞懸液制備的最佳酶消化法。
方法 采集 10 根長度一致的小鼠 小腸,隨機分為兩組,每組分別采用以膠原酶 A 或膠原酶 VIII 為主的酶消化法制備固有層單細胞懸液,比較這兩種 酶消化法對單細胞懸液細胞獲得率、細胞活性和細胞表面抗原的影響,然后對較優(yōu)酶消化法制備的單細胞懸液進 行流式檢測。
結(jié)果 與以膠原酶 VIII 為主的酶消化法相比,以膠原酶 A 為主的酶消化法可以獲得更高的細胞產(chǎn)量 (9.48±1.10)×10 9 vs(4.18±1.02)×10 9 、活細胞比例(86.36±3.32)% vs(61.62±10.93)%以及活性 CD45 +細胞比例 (57.19±5.11)% vs(26.01±11.44)%、活性 CD3 +細胞比例(8.73±2.89)% vs(4.52±2.49)%、活性 CD4 +細胞比例 (6.19±2.09)% vs(3.22±1.91)%和活性 B220 +細胞比例(15.06±4.27)% vs(5.07±2.20)%,為后續(xù)流式檢測提供 了高質(zhì)量細胞。
結(jié)論 以膠原酶 A 為主的酶消化法更適合于小鼠小腸固有層單細胞懸液的制備。
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