慢病毒(Lentivirus) 載體是以HIV-1 (人類免疫缺陷Ⅰ型病毒)為基礎(chǔ)發(fā)展起來的基因治療載體。區(qū)別一般的逆轉(zhuǎn)錄病毒載體，它對分裂細(xì)胞和非分裂細(xì)胞均具有感染能力。對于一些較難轉(zhuǎn)染的細(xì)胞，如原代細(xì)胞、干細(xì)胞、不分化的細(xì)胞等，能大大提高目的基因轉(zhuǎn)導(dǎo)效率，而且目的基因整合到宿主細(xì)胞基因組的幾率大大增加，這就為RNAi、cDNA克隆以及報告基因的研究提供了一個有利的途徑。對于一些按常規(guī)方法難以轉(zhuǎn)染甚至無法轉(zhuǎn)染的細(xì)胞，通過病毒介導(dǎo)的實驗?zāi)軌虼蟠筇岣呋虻霓D(zhuǎn)導(dǎo)效率，以達(dá)到目的基因的高效瞬時表達(dá)
慢病毒包裝系統(tǒng)一般由慢病毒表達(dá)載體和慢病毒包裝載體組成。慢病毒表達(dá)載體，即通常所說的穿梭載體，包含了包裝、轉(zhuǎn)染、穩(wěn)定整合所需要的遺傳信息。
實驗流程
1. 根據(jù)目的基因相關(guān)信息（序列，序列號等），構(gòu)建含有外源基因或siRNA的重組載體；
2. 對于測序正確的重組質(zhì)粒，提取和純化高質(zhì)量的不含內(nèi)毒素的重組質(zhì)粒；
3. 使用高效重組載體和病毒包裝質(zhì)粒共轉(zhuǎn)染293T 細(xì)胞，進(jìn)行病毒包裝和生產(chǎn)，收集病毒液；
4. 濃縮、純化病毒液；
5. 用高質(zhì)量的病毒液感染細(xì)胞；
6. 通過定量PCR精確測定病毒滴度（高精確滴定方法）和Western 分析實驗結(jié)果；
7. 用高質(zhì)量的病毒液感染宿主細(xì)胞；檢測基因功能或者siRNA的沉默效率以及使用藥物進(jìn)行穩(wěn)定轉(zhuǎn)染細(xì)胞株的篩選，通常狀況下，篩選的細(xì)胞克隆株具有長期的表達(dá)穩(wěn)定性。病毒液足夠用于一般的動物活體實驗。 拓普生物提供慢病毒載體構(gòu)建，RNAi(shRNA)、miRNA、過表達(dá)和干擾慢病毒包裝，以及基于慢病毒技術(shù)的穩(wěn)定細(xì)胞系構(gòu)建服務(wù)。拓普生物慢病毒包裝特點：
1.采用第三代4質(zhì)粒慢病毒包裝系統(tǒng)，生物安全性更高；2.采用VSV-G包膜，宿主范圍更廣；3. 產(chǎn)生的慢病毒滴度高，可達(dá)108~1010TU/mL；4.各種慢病毒穿梭載體可供選擇：過表達(dá)、ShRNA、miRNA、Tet誘導(dǎo)表達(dá)載體等；5.可帶有熒光報告基因（GFP、RFP、mCherry、Luciferase等）和藥篩標(biāo)記基因（Puro、Neo、Hygromycin等），有多種啟動子（CMV、PGK、CAG、Ubc等）可供選擇；6.4~5周內(nèi)即可完成載體構(gòu)建以及病毒包裝服務(wù)。
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